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分享PCR實(shí)驗室設計及建設基本要求

發(fā)表時(shí)間： 2020-07-10

 PCR實(shí)驗指的是基因擴增實(shí)驗，其特點(diǎn)是能將微量的DNA大幅增加，是分子生物學(xué)研究和實(shí)驗的常規方法，PCR實(shí)驗室廣泛應用于生物學(xué)各個(gè)領(lǐng)域，例如：乙型肝炎，禽疫病、艾滋病檢測，癌基因的檢測和診斷，個(gè)體識別，DNA指紋，親子鑒定及法醫物證等等。湖南實(shí)驗室建設就PCR實(shí)驗室設計和建設要求逐一給大家解釋?zhuān)?br style="margin: 0px; padding: 0px; list-style: none; color: rgb(102, 102, 102); font-family: Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif; font-size: 14px; white-space: normal; background-color: rgb(255, 255, 255);"/>

分享PCR實(shí)驗室設計及建設基本要求
 
一、PCR實(shí)驗室布局
 
1、PCR實(shí)驗室原則上分為：①試劑準備區；②樣品制備區；③擴增區；④擴增產(chǎn)物分析區，共四個(gè)單獨的工作區域。并設有專(zhuān)用走廊，各工作區域應設緩沖間，工作區與緩沖間宜安裝連鎖裝置。
 
2、不同功能的工作區應是分隔獨立的，各工作區有明顯的標志，不能直通，如果緊密連接，需安裝物品傳遞窗。
 
① 試劑準備區和樣品制備區為擴增前區；
 
② 擴增區和擴增產(chǎn)物分析區為為擴增后區，即從：試劑準備區——樣品制備區——PCR擴增室——產(chǎn)物分析室，不得逆向流動(dòng)。
 
3、實(shí)驗室的氣流也應從擴增前區流向擴增后區，不得逆向流動(dòng)。
 
4、各工作區的頂部應該安裝紫外燈，紫外燈波長(cháng)一般為254mm,配置要求為每20㎡一支40W的紫外燈。
 
二、實(shí)驗室各區功能及主要設備
 
1、試劑準備區：
 
① 主要進(jìn)行試劑的制備，分裝和主反應混合液的制備。試劑盒用于樣品制作的材料應直接運送至該區域。
 
② 試劑原材料必須貯存在本區內，并在本區內制備成所需的試劑。
 
③ 本區主要設備有冰箱，天平，離心機，加樣器，振蕩器等。
 
④ 本區對氣流壓力的控制，并沒(méi)有嚴格的要求，一般為+10Pa。
 
2、樣品制備區：
 
① 主要進(jìn)行樣品的保存，核酸提取，貯存及其加入至擴增反應管和測定DNA的合成。
 
② 本區主要設備有冰箱，生物安全柜，離心機，加樣器，振蕩器等。
 
③ 本區的壓力梯度要求為：相對于鄰近區域為正壓，以避免從鄰近區進(jìn)入本區的氣溶膠污染，壓力一般設計為+10Pa。
 
3、擴增區：
 
① 主要進(jìn)行DNA擴增項目。
 
② 已制備的DNA模板(來(lái)自樣品制備區)的加入和主反應混合液(來(lái)自試劑準備區)制備成反應混合液等也可在本區內進(jìn)行。
 
③ 本區主要設備有：冰箱，加樣器，離心機，擴增儀等。
 
④ 本區的壓力梯度要求為：相對于鄰近區域為負壓，以避免氣溶從本區漏出，壓力一般設計為-25Pa。
 
4、 擴增產(chǎn)物分析區：
 
① 主要進(jìn)行擴增產(chǎn)物的測定。
 
② 本區主要設備有加樣器，洗板機、酶標儀和水浴箱等。
 
③ 本區的壓力梯度的要求為：相對于鄰近區域為負壓，以避免擴增產(chǎn)物從本區擴散至其它區域，壓力一般設計為-25Pa。
 
三、PCR實(shí)驗室通風(fēng)系統及壓力控制
 
① 各區域之間應具備單間的實(shí)驗工藝流、氣流、物流與人流，形成單向流程的保護屏障。避免實(shí)驗室之間的相互干擾，也防止氣溶膠擴散對實(shí)驗過(guò)程造成污染。
 
② PCR實(shí)驗室并沒(méi)有嚴格的凈化要求，但是為避免各個(gè)實(shí)驗區域交叉污染的可能性，宜采用全送全排的氣流組織形式，嚴格控制送風(fēng)、排風(fēng)的比例，以保證整個(gè)實(shí)驗區的壓力要求。
 
四、PCR實(shí)驗室裝飾
 
① 實(shí)驗室圍護結構應牢固，氣密性好;
 
② 所有陰陽(yáng)角宜采用圓弧過(guò)度;
 
③ 墻體內壁光潔，不積塵、易清洗、易消毒、耐腐蝕;
 
④ 地面使用環(huán)氧樹(shù)脂自流坪或PVC卷材，材料應滿(mǎn)足光潔、耐腐蝕、無(wú)縫隙、無(wú)滲漏的基本要求。
 
五、PCR實(shí)驗室注意事項
 
1、區域大小設置：樣品制備區要放置生物安全柜和低溫冰箱，空間應大一些。而試劑準備區，擴增區，擴增產(chǎn)物分析區，空間可以相對小一些。
 
2、應急裝置配備：試劑準備區，樣品制備區應設緊急洗眼器，以保證操作人員的安全。
 
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